三葉青快速繁殖方法

作者：匿名

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發(fā)布時間：2016-12-01 17:35:12

　　三葉青又名有角烏蘞莓、石老鼠，為葡萄科崖爬藤屬植物三葉崖爬藤。主要分布于長江以南地區(qū)，但多年來三葉青被毀滅性挖取，種源稀少。筆者應(yīng)用組織培養(yǎng)進(jìn)行快速繁殖研究，以期解決資源緊缺問題。1材料。1.1藥材：試驗材料采自安徽省，外植體取莖尖、帶腋芽的莖段和葉片。1.2培養(yǎng)基：基本培養(yǎng)基為MS按不同處理方案添加不同類型的植物激素，用0.1NNaOH和0.1NHCL調(diào)節(jié)pH值為5.8~6.0，在高壓滅菌鍋中高溫(121℃)滅菌20min。上述培養(yǎng)基均加3%蔗糖、1%瓊脂，培養(yǎng)室溫度25℃左右，每天光照13h，光照強(qiáng)度20001x左右。移栽基質(zhì)經(jīng)過滅菌消毒處理，按m(珍珠巖)：m(草炭)：m(菜園土)=1∶1∶1比例混合。2試驗方法與結(jié)果。2.1樣品處理：取莖尖、莖段(帶芽)和葉為外植體，按下列程序進(jìn)行消毒：

　　取材→自來水粗洗→5%洗衣粉水溶液漂洗5min→自來水沖洗30min→75%乙醇擦洗表面→0.1%升汞溶液中消毒5min→2%次氯酸鈉溶液中消毒20min→無菌水沖洗4~6次，然后在無菌工作臺中將外植體切成0.5~1.0cm長的小段。

　　2.2誘芽培養(yǎng)：分別將不同部位的外植體接種到表1各培養(yǎng)基中，觀察出芽情況，計算誘芽率。不同植體對愈傷組織誘導(dǎo)不一樣，在由3號培養(yǎng)基的激素濃度配比下試驗結(jié)果(見表2)。2.3繼代增殖：將誘導(dǎo)出來的愈傷組織及芽叢轉(zhuǎn)到新的3種不同激素組合的培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)。將初代培養(yǎng)的芽叢分離并切割成2cm的莖段，接種于培養(yǎng)基MS+NAA0.2;MS+6BA0.02+NAA0.5;MS+6BA2+NAA0.2。接種后給予全天光照，室溫20~28℃。1周后腋芽萌動且萌蘗生長很快。2.4生根培養(yǎng)：不同激素組合對其生根狀況影響較大(表4)。將誘導(dǎo)成活的叢生芽切割成單芽，分別轉(zhuǎn)接到表3各培養(yǎng)基中(每瓶接1個芽)，30d后4號培養(yǎng)基的生根率最高達(dá)74%。2.5移栽定植：芽長到3~4cm時，切取健壯的植株轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上，所有的植株都能正常生長，培養(yǎng)1周后，即誘導(dǎo)出根，10d后每株可長出3～5條根，根長達(dá)4～5cm。再培養(yǎng)1周，植株健壯，葉色濃綠，然后揭去紙蓋練苗。輕輕洗去根部培養(yǎng)基，移到蛭石的小盆中，蓋上塑料膜及燒杯，保持較高的溫度，10d后揭去塑料膜及燒杯，可移栽到大田，小苗成活率95%。3小結(jié)。

　　對三葉青不同部位的外植體進(jìn)行誘導(dǎo)，在相同消毒處理下和同種培養(yǎng)基中，最佳誘導(dǎo)外植體為莖尖。初代培養(yǎng)過程中以3號培養(yǎng)基為最佳，生根培養(yǎng)基以4號為最佳。BA在三葉青的繼代培養(yǎng)中的作用可以忽略不計，可以認(rèn)為MS+NAA0.2是最佳組合的繼代增殖培養(yǎng)基。